Megazyme試劑盒抗性淀粉的測定方法

　　Megazyme試劑盒用于分析a-葡聚糖（包括淀粉，糖原，植物糖原和非抗性麥芽糊精），一個(gè)樣品溶液的重復(fù)測定中，吸收值會(huì)有0.005至0.010的波動(dòng)。當(dāng)樣品體積為1ml時(shí)，這相當(dāng)于0.05-1ml/L濃度的D-葡萄糖。如果樣品在準(zhǔn)備過程中被稀釋，結(jié)果需要乘以稀釋倍數(shù)。例如在樣品準(zhǔn)備時(shí)，樣品稱重，如10g/L，變異范圍將在0.02至0.05g/100g。

　　抗性淀粉的測定方法：樣品使用淀粉葡糖苷酶（AMG）37℃振蕩水浴孵育16小時(shí)，在這期間，通過兩種酶的聯(lián)合作用，非抗性淀粉被溶解，水解成D-葡萄糖，孵育結(jié)束后，終止反應(yīng)。離心上述溶液，收集上清勿棄，底部殘留絮狀團(tuán)即為樣品中的RS，用含水的IMS洗滌絮狀團(tuán)，洗滌后離心，再重復(fù)一次洗滌離心，收集離心后獲得的上清，與之前收集的上清混合。D-葡萄糖用葡糖氧化酶/過氧化物酶試劑測定，這也是對(duì)樣品中RS含量的測定，非抗性淀粉（可溶性淀粉）的測定可通過集中的上清液并定容至100mL，再用GOPOD測定D-葡萄糖完成。

　　Megazyme試劑盒檢測原理：洗滌后離心，再重復(fù)一次洗滌離心，收集離心后獲得的上清，與之前收集的上清混合。小心倒出試管殘留的液體，將絮狀團(tuán)置于冰水浴中，加入2MKOH溶解，邊溶解邊用磁力攪拌機(jī)劇烈攪拌。用醋酸鹽緩沖液將溶液調(diào)至中性，用AMG將淀粉定量水解為葡萄糖。D-葡萄糖用葡糖氧化酶/過氧化物酶試劑（GOPOD）測定，這也是對(duì)樣品中RS含量的測定。