Coriell Institute細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)和使用方法介紹

　　一、CoriellInstitute細(xì)胞實(shí)驗(yàn)方法：

　　藥敏片的制備：一般情況下，如無法獲取，可以自行制備。首先定性濾紙，用內(nèi)徑為6mm的打孔器制備好紙片，按每包100片包裝好，高壓滅菌，烘干備用。然后，將待檢藥物用蒸餾水按實(shí)際用量的10倍稀釋，充分溶解后，取1mL加到100片滅菌好的紙片上，放入4℃冰箱，待其充分吸收后（一般要4－8小時(shí)），平鋪于平皿上，在37℃溫箱中充分烘干，干燥后立即封裝于滅菌的小瓶?jī)?nèi)，密閉保存。

　　二、使用方法：

　　培養(yǎng)基的制備：用托盤天平稱取營(yíng)養(yǎng)瓊脂4克，加入潔凈的容器內(nèi)，再用量筒加入200mL蒸餾水，121℃，滅菌20分鐘。滅菌后，冷卻至50－60℃，在超凈臺(tái)內(nèi)，迅速將培養(yǎng)基倒入滅菌的培養(yǎng)皿內(nèi)，每個(gè)平皿15mL左右，輕搖平皿，使培養(yǎng)基分布均勻。待其冷卻凝固后，即可使用。

　　谷酰胺脫掉基后，可作為培養(yǎng)細(xì)胞的能量來源，參與蛋白質(zhì)的合成和能量代謝。在缺少谷酰胺時(shí)，細(xì)胞生長(zhǎng)不良而死亡。所以，各種培養(yǎng)液中都含有較大量的谷酰胺。谷酰胺在溶液中很不穩(wěn)定，應(yīng)置-20℃冰凍保存，用前加入培養(yǎng)基中。加有谷酰胺的液體培養(yǎng)基4度冰箱儲(chǔ)存兩周以上時(shí)，應(yīng)重新加入原來量的谷酰胺。

　　CoriellInstitute細(xì)胞試驗(yàn)操作中常配制高濃度(100倍)的谷酰胺溶液(1ml/支)，分裝使用，-20℃保存。使用時(shí)，每支1ml的谷酰胺加入到99ml*培養(yǎng)基中，使其濃度為2mM培養(yǎng)基。